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3月3日，消費者文教基金會召開記者會，呼籲社會大眾參與第二階段「美國牛肉輸台議定書重啟談判」公民投票連署。會中除公布研究資料顯示美國牛肉與狂牛症帶來的潛在威脅外，並訂出4月22日到達50萬人的中程目標，希望7月15日前能完成120萬人連署的目標。

2009年11月1日，由消基會、主婦聯盟環境保護基金會、台灣主婦聯盟生活消費合作社、董氏基金會、民間監督健保聯盟等單位共同發起以「美國牛肉輸台議定書重啟談判」為訴求的公投連署。並順利收集到21萬份連署書，通過第一階段公投門檻而正式成案。接下來則需於8月10日之前，收集到86萬份以上的有效連署書，以正式開辦公民投票。

消基會董事長謝天仁對媒體表示，「普力昂變異性蛋白」是新型庫賈氏症（俗稱狂牛症）的病因，且並非不吃牛肉就可倖免。2008年6月美國的科學期刊「環境科學技術」（Environmental Science& Technology）中一份研究報告指出，變性的普立昂蛋白質可以抵抗污水處理的過程，有可能因灌溉而污染水果或蔬菜。而英國醫學雜誌 Lancent於1996年發表關於新型庫賈氏症的文章中提到，當時英國發現的10位狂牛症患者中，有一位自1991年起就是一位絕對的素食者。 他強調，除了吃到污染的食物或飲水外，透過輸血也可能感染狂牛症，因此已非禁止牛肉特定部位進口可解決的問題。

消基會秘書長黃鈺生說，台美簽約後的第180天（4月22日），台美將再度諮商，而美方可能要求進一步開放其餘項目進口。消基會希望連署第一階段公投的21萬民眾能夠1人拉10人，到4月22日前完成50萬份連署，如能於7月15日達成120萬份安全份數，將可望正式開辦公投。

「抵制美牛行動聯盟」在社群網站Facebook擁有上萬名會員，聯盟執行長祝務耕表示，美國牛肉進口的確是重要的民生議題。而對於4月22日的台美貿易諮商，他並不樂觀。他並強調，能否翻轉台灣政府總是片面接受美方要求的狀況？需要台灣的消費者展現力量。祝務耕指出，行動聯盟將協助消基會推動連署，並預計接下來將架設專屬網站、並展開一連串宣傳的行動。